Fosterets kvægserum - Fetal bovine serum
Fosterets kvægserum ( FBS ) kommer fra blodet trukket fra et kvægfoster via et lukket opsamlingssystem på slagteriet . Fosterets bovint serum er det mest anvendte serumtilskud til in vitro cellekultur af eukaryote celler . Dette skyldes, at det har et meget lavt niveau af antistoffer og indeholder flere vækstfaktorer , hvilket muliggør alsidighed i mange forskellige cellekulturapplikationer.
Det kugleformede protein , bovint serumalbumin (BSA), er en hovedbestanddel af føtalt bovint serum. Den rige række proteiner i føtalt bovint serum opretholder dyrkede celler i et medium, hvor de kan overleve, vokse og dele sig.
FBS er ikke en fuldt defineret mediekomponent, og kan som sådan variere i sammensætning mellem batcher. Som et resultat er serumfrie og kemisk definerede medier (CDM) blevet udviklet som et spørgsmål om god laboratoriepraksis . Effektiviteten af serumfrie medier er dog begrænset; mange cellelinier kræver stadig serum for at vokse, og mange serumfrie medieformuleringer er beregnet til snævert definerede typer celler. Derfor anvendes føtale serum stadig i vid udstrækning i cellekultur.
Produktion
Fosterets kvægserum er et biprodukt fra mejeriindustrien. Fosterets kvægserum, som med langt størstedelen af dyreserum, der anvendes i cellekultur, produceres af blod, der opsamles på kommercielle slagterier fra malkekvæg, der også leverer kød bestemt til konsum.
Det første trin i produktionsprocessen for føtalt bovint serum er høst af blod fra det bovine foster, efter at fosteret er fjernet fra den slagtede ko. Blodet opsamles aseptisk i en steril beholder eller blodpose og får derefter størkne. Den normale metode til opsamling er hjertepunktur, hvor en nål indsættes i hjertet. Dette minimerer "faren for serumkontaminering med mikroorganismer fra fosteret selv og miljøet". Derefter centrifugeres det for at fjerne fibrinkoaglen, og de resterende blodlegemer danner det klare gule (strå) farvede serum. Serumet fryses inden yderligere behandling, som er nødvendigt for at gøre det egnet til cellekultur.
Det andet trin i behandlingen involverer filtrering, typisk ved anvendelse af en filtreringskæde, hvor den endelige filtrering er tredobbelt sterile 0,1 mikrometer membranfiltre. Når det behandles af en velrenommeret kommerciel serumleverandør, underkastes det steriliserede føtalt bovint serum en streng kvalitetskontrolstest og leveres med et detaljeret analysecertifikat. Certifikatet giver fulde testresultater og information om serumets oprindelse. Analysecertifikater varierer mellem kommercielle leverandører, men hver indeholder normalt følgende detaljer: filtreringserklæring, oprindelsesland, test af cellevækstydelse, test af mikrobiel sterilitet, screening for mycoplasma og virus, endotoksin , hæmoglobin , IgG og totalproteinassays.
Etik
Etiske spørgsmål er blevet rejst angående blodopsamlingsprocessen på grund af den potentielle lidelse, der er forårsaget af fosteret. Selvom anoxi eller aktiv slagtning kunne bruges til at fremkalde bevidstløshed eller død før serumhøstning, kan udsættelse af levende ufødte kalve for ilt få dem til at få bevidsthed, før de dræbes, hvilket resulterer i en aktiv debat om etiket ved høstning af serum.
Serumbrug
Fosterets bovint serum er kommercielt tilgængeligt fra mange producenter, og fordi celler dyrket in vitro er meget følsomme, tester kunder normalt specifikke batcher for at kontrollere, om de er egnede til deres specifikke celletype. Når der skiftes fra batch til batch, er det almindeligt at tilpasse cellerne til den nye batch af materiale, for eksempel ved at blande 50% af det gamle serum med 50% af det nye serum og lade cellerne akklimatisere sig til det nye materiale.
Serum opbevares frossent for at bevare stabiliteten af komponenter såsom vækstfaktorer. Når serum er optøet, kan der forekomme noget nedbør. Dette er et normalt fænomen, og det kompromitterer ikke serumkvaliteten på nogen måde. Bundfaldet kan fjernes ved at overføre serum til sterile rør og centrifugere i 5 minutter ved 400 x g .
For at begrænse mængden af nedbør anbefales det, at serumet optøes i køleskab ved 2-8 ° C. Serumet skal omrøres regelmæssigt under denne proces. Gentagne fryse- / optøningscyklusser bør undgås, og det tilrådes at dispensere serum i alikvoter til engangsbrug inden frysning.
Tekniske problemer
FBS indeholder en kompleks række proteinkomponenter, som kræves af mange celler for at vokse, hvorfor det med succes er blevet brugt i cellekultur. Desværre kan store mængder udefinerede proteiner føre til uønsket stimulering af celler. Dette er grunden til, at 'serum sult' ofte bruges i eksperimenter, hvor subtile ændringer i cytokinekspression skal måles. Dette er, hvor FBS kan bruges til at opretholde cellerne, men inden eksperimentet fjernes serummet efter passage af cellerne for at normalisere cytokinekspressionen. En anden mulig tilgang er at anvende trækulstrimlet FBS, som ikke synes at være så stimulerende for celler i kultur, samtidig med at det understøtter vækst af sunde cellelag.
Kildeshistorie
Serum produceret til brug i bioteknologiindustrien og forskningssektorerne er stærkt reguleret. Indsamling og bevægelse af alle animalske produkter globalt er strengt kontrolleret. Veterinærkontrol med animalske produkter følger stort set de regler, der er fastsat af EU (GD SANCO) og USA (USDA). Den nuværende forordning om import af animalske biprodukter til EU er dækket af forordning (EU) 1069/2009 og gennemførelsesdokumentet forordning (EU) 142/2011.
FBS er et produkt samlet over hele verden, hvor hovedkollektionerne er centreret i USA, Australien, New Zealand, Canada, Mellemamerika, Sydamerika og Europa.
Globalt salg
Salget af FBS i 2008 blev anslået til at være 700.000 liter globalt.
Samlere, producenter og slutbrugere af FBS globalt er medlemmer af ISIA, International Serum Industry Association. Medlemsvirksomheder er angivet på ISIA-webstedet. Fuld kontaktoplysninger er tilgængelige via denne portal, og ISIA er i stand til at besvare eventuelle spørgsmål vedrørende indsamling og brug af denne vigtige ressource.
International Serum Industry Association blev stiftet i juni 2006 for selvregulering af en tidligere ikke-standardiseret industri. ISIA-missionserklæringen siger: ”ISIA skal etablere, fremme og sikre overholdelse af kompromisløse standarder for ekspertise og etik inden for forretningspraksis i den globale leveringsindustri for dyreserum og animalsk afledte produkter. Vores primære fokus vil være på sikkerhed og sikker brug af serum og animalsk afledte produkter gennem korrekt oprindelig sporbarhed, sandhed i mærkning og passende standardisering og tilsyn. ”
Se også
- Humant blodpladelysat (HPL) som alternativ til FBS