Preimplantation genetisk diagnose - Preimplantation genetic diagnosis

1♂︎ — Sæd indsamles fra en han.
1♀︎ — Æg indsamles via in vitro -befrugtning fra en hun.
2a — Sæd og æg befrugtes.
2b - De resulterende embryoner opbevares sikkert og overvåges for at se, hvad der vil trives.
3a —Fostrene får lov til at udvikle sig; dem, der trives, får identifikatorer.
3b - Der udføres en genetisk test på hvert embryo for en given egenskab, og resultaterne matches med embryonerne.
4 —Fostrene uden det ønskede træk identificeres og kasseres.
5 - De resterende embryoner får lov til at vokse til det punkt, at de kan implanteres.
6a - Embryonerne med det ønskede træk implanteres.
6b - Embryonerne resulterer i en sund graviditet.
6c - Faderlige tvillinger med det ønskede træk, der ikke kommer til udtryk i deres mor, fødes.

Pre-implantation genetisk diagnose ( PGD eller PigD ) er den genetiske profilering af embryoner før implantation (som en form for embryo profilering ), og nogle gange endda af oocytter inden befrugtning . PGD ​​betragtes på lignende måde som prænatal diagnose . Når den bruges til at screene for en specifik genetisk sygdom , er dens største fordel, at den undgår selektiv abort , da metoden gør det meget sandsynligt, at barnet vil være fri for den sygdom, der overvejes. PGD ​​er således et supplement til assisteret reproduktionsteknologi og kræver in vitro -befrugtning (IVF) for at opnå oocytter eller embryoner til evaluering. Embryoer opnås generelt gennem blastomer eller blastocystbiopsi. Sidstnævnte teknik har vist sig at være mindre skadelig for embryoet, derfor er det tilrådeligt at udføre biopsien omkring dag 5 eller 6 i udviklingen.

Verdens første PGD blev udført af Handyside, Kontogianni og Winston på Hammersmith Hospital i London. Kvindelige embryoner blev selektivt overført til fem par med risiko for X-forbundet sygdom , hvilket resulterede i to tvillinger og en singleton-graviditet.

Udtrykket præimplantationsgenetisk screening ( PGS ) refererer til en række teknikker til testning af, om embryoner (opnået via IVF/ICSI) har unormalt kromosomtal. Med andre ord tester det, om et embryo er aneuploid eller ej. PGS kaldes også aneuploidi screening. PGS blev omdøbt til præimplantationsgenetisk diagnose for aneuploidi (PGD-A) af Preimplantation Genetic Diagnosis International Society (PGDIS) i 2016.

PGD ​​gør det muligt at studere æg eller embryos DNA for at vælge dem, der bærer visse mutationer for genetiske sygdomme. Det er nyttigt, når der er tidligere kromosomale eller genetiske lidelser i familien og inden for rammerne af in vitro -befrugtningsprogrammer.

Procedurerne kan også kaldes præimplantation genetisk profilering for at tilpasse sig det faktum, at de undertiden bruges på oocytter eller embryoner før implantation af andre årsager end diagnose eller screening.

Procedurer udført på kønsceller før befrugtning kan i stedet omtales som metoder til selektion af oocytter eller selektion af sædceller , selv om metoderne og målene delvis overlapper PGD.

Historie

I 1968 rapporterede Robert Edwards og Richard Gardner den vellykkede identifikation af kaninblastocysters køn . Det var først i 1980'erne, at human IVF blev fuldt udviklet, hvilket faldt sammen med gennembruddet af den meget følsomme polymerasekædereaktion (PCR) teknologi. Handyside, Kontogianni og Winstons første succesrige tests skete i oktober 1989, med de første fødsler i 1990, selvom de foreløbige eksperimenter var blevet offentliggjort nogle år tidligere. I disse første tilfælde blev PCR brugt til kønsbestemmelse af patienter, der bærer X-bundne sygdomme.

De første kliniske tilfælde

Elena Kontogianni studerede til sin ph.d. på Hammersmith Hospital på encellede PCR til sex, hvilket hun gjorde ved at forstærke en gentagen region af Y-kromosomet. Det var denne tilgang, hun brugte til verdens første PGD -sager.

Kvindelige embryoner blev selektivt overført til fem par med risiko for X-forbundet sygdom, hvilket resulterede i to tvillinger og en singleton-graviditet. Fordi Y -kromosomområdet Kontogianni forstærkede indeholdt mange gentagelser, var det mere effektivt end at forsøge at forstærke en unik region. Et bånd på PCR -gelen indikerede, at embryoet var mandligt, og fraværet af et bånd indikerede, at embryoet var hun. Imidlertid resulterede amplifikationsfejl eller en anucleaatblastomer også i fravær af et bånd på PCR -gelen. For at reducere risikoen for fejldiagnose fortsatte Kontogianni med at forstærke sekvenser på X og Y (Kontogianni et al., 1991). På det tidspunkt var der intet kendt om alleludfald, cumuluscelleforurening eller amplifikationsfejl fra enkelte celler. I løbet af 1980'erne blev humane IVF -embryoner udelukkende overført på udviklingsdag to, da det anvendte kulturmedium ikke var i stand til pålideligt at vokse embryoner forbi dette stadie. Da biopsien skulle udføres på dag tre, blev de første diagnoser alle udført på en dag med overførsel af embryonerne sent på dag tre. En sammenligning af dag to og dag tre overførsler indikerede, at dette ikke ville påvirke graviditetsraten negativt. Bekymringen for embryoner, der blev arresteret, var så stor, at nogle overførsler fandt sted i de tidlige timer på dag fire, så embryonerne blev fjernet fra kulturen hurtigst muligt. Der var mange aftener på Hammersmith, da en overførsel blev udført klokken 1 på dag fire, og forskere vendte tilbage til laboratoriet klokken 7 for at starte den næste sag. Winston hjalp med at levere de fleste af de første PGD -babyer.

PGD ​​blev stadig mere populær i løbet af 1990'erne, da den blev brugt til at bestemme en håndfuld alvorlige genetiske lidelser, såsom seglcelleanæmi , Tay-Sachs sygdom , Duchennes muskeldystrofi og beta-thalassæmi .

Samfund

Som med alle medicinske indgreb i forbindelse med menneskelig reproduktion rejser PGD stærke, ofte modstridende meninger om social accept, især på grund af dets eugeniske implikationer. I nogle lande, som f.eks. Tyskland, er PGD tilladt til kun at forhindre dødfødsler og genetiske sygdomme, i andre lande er PGD tilladt i lov, men dets drift kontrolleres af staten.

Indikationer og anvendelser

PGD ​​bruges primært til forebyggelse af genetisk sygdom ved kun at vælge de embryoner, der ikke har en kendt genetisk lidelse. PGD ​​kan også bruges til at øge chancerne for en vellykket graviditet, til at matche en søskende i HLA -type for at være donor, have mindre kræftforudsætning og til kønsvalg .

Monogene lidelser

PGD ​​er tilgængelig for et stort antal monogene lidelser-det vil sige lidelser, der kun skyldes et enkelt gen ( autosomalt recessivt , autosomalt dominerende eller X-bundet )-eller af kromosomale strukturelle aberrationer (såsom en afbalanceret translokation ). PGD ​​hjælper disse par med at identificere embryoner, der bærer en genetisk sygdom eller et kromosomabnormalitet, og dermed undgå syge afkom. De hyppigst diagnosticerede autosomale recessive lidelser er cystisk fibrose , beta- thalassæmi , seglcelleanæmi og spinal muskelatrofi type 1. De mest almindelige dominerende sygdomme er myotonisk dystrofi , Huntingtons sygdom og Charcot-Marie-Tooth-sygdom ; og for de X-bundne sygdomme udføres de fleste cyklusser for skrøbeligt X-syndrom , hæmofili A og Duchenne muskeldystrofi . Selvom det er ret sjældent, rapporterer nogle centre PGD for mitokondrielle lidelser eller to indikationer samtidigt.

PGD ​​udføres nu også i en sygdom kaldet arvelige multiple exostoser (MHE/MO/HME).

Derudover er der ufrugtbare par, der bærer en arvelig tilstand, og som vælger PGD, da det let kan kombineres med deres IVF -behandling.

Graviditetschancer

Preimplantation genetisk profilering (PGP) er blevet foreslået som en metode til at bestemme embryokvalitet ved in vitro -befrugtning for at vælge et embryo, der ser ud til at have de største chancer for en vellykket graviditet. Da resultaterne af PGP er afhængige af vurderingen af ​​en enkelt celle, har PGP imidlertid iboende begrænsninger, da den testede celle muligvis ikke er repræsentativ for embryoet på grund af mosaicisme . Desuden fandt en undersøgelse, at diagnoser af biopsierne fra de samme embryoner på to separate laboratorier kun matchede 50% af tiden.

En systematisk gennemgang og metaanalyse af eksisterende randomiserede kontrollerede forsøg resulterede i, at der ikke er tegn på en gavnlig effekt af PGP målt ved levende fødselsrate . Tværtimod, for kvinder i en avanceret moderalder, sænker PGP betydeligt den levende fødselsrate. Tekniske ulemper, såsom biopsiens invasivitet og kromosomal mosaicisme er de væsentligste bagvedliggende faktorer for ineffektivitet af PGP. Normale levendefødte af raske afkom efter overførsler af embryoner, der anses for aneuploide af PGP, er blevet rapporteret over hele verden.

Alternative metoder til at bestemme embryokvalitet til forudsigelse af graviditetshastigheder omfatter mikroskopi samt profilering af RNA og proteinekspression .

HLA matchende

Humant leukocytantigen (HLA) -typning af embryoner, så barnets HLA matcher en syg søskende, der kan bruges til donation af stamcellestamblod . Barnet er i denne forstand en " frelsersøskende " for modtagerbarnet. HLA -typning er i mellemtiden blevet en vigtig PGD -indikation i de lande, hvor loven tillader det. HLA -matchningen kan kombineres med diagnosen for monogene sygdomme såsom Fanconi -anæmi eller beta -thalassæmi i de tilfælde, hvor den skrantende søskende er ramt af denne sygdom, eller den kan undtagelsesvis udføres alene i tilfælde som f.eks. Børn med leukæmi . Det vigtigste etiske argument imod er den mulige udnyttelse af barnet, selvom nogle forfattere fastholder, at det kantianske imperativ ikke overtrædes, da det kommende donorbarn ikke kun vil være en donor, men også et elsket individ i familien.

Kræftforudsætning

En nyere anvendelse af PGD er at diagnosticere senstartede sygdomme og (kræft) disponeringssyndromer. Da de berørte personer forbliver raske indtil sygdommens begyndelse, ofte i det fjerde årti af livet, er der debat om, hvorvidt PGD er passende i disse tilfælde. Overvejelser omfatter den store sandsynlighed for at udvikle lidelserne og potentialet for helbredelser. For eksempel i disponeringssyndromer, såsom BRCA -mutationer, der disponerer individet for brystkræft, er resultaterne uklare. Selvom PGD ofte betragtes som en tidlig form for prænatal diagnose, adskiller karakteren af ​​anmodningerne om PGD sig ofte fra anmodninger om prenatal diagnose, der stilles, når moderen allerede er gravid. Nogle af de almindeligt accepterede indikationer for PGD ville ikke være acceptable til prænatal diagnose.

Sex skelnen

Preimplantation genetisk diagnose tilvejebringer en metode til prænatal kønsdifferentiering allerede før implantation og kan derfor betegnes præimplantation kønsdifferentiering . Potentielle anvendelser af præimplantationskøn skelnen omfatter:

• Et supplement til specifik gentest for monogene lidelser, som kan være meget nyttig til genetiske sygdomme, hvis præsentation er knyttet til køn , såsom for eksempel X-bundne sygdomme .
• Evne til at forberede alle kønsafhængige aspekter af forældreskab.
• Køn valg . En undersøgelse fra 2006 viste, at 42 procent af de klinikker, der tilbyder PGD, har leveret det til kønsvalg af ikke-medicinske årsager. Næsten halvdelen af ​​disse klinikker udfører det kun til "familiebalancering", hvor et par med to eller flere børn af det ene køn ønsker et barn af det andet, men halvdelen begrænser ikke kønsvalg til familiebalancering. I Indien er denne praksis blevet brugt til kun at vælge mandlige embryoner, selvom denne praksis er ulovlig. Meninger om, hvorvidt kønsudvælgelse af ikke-medicinske årsager er etisk acceptabelt, er meget forskellige, som eksemplificeret ved det faktum, at ESHRE Task Force ikke kunne formulere en ensartet anbefaling.

For familier med risiko for X-bundne sygdomme får patienterne en enkelt PGD-analyse af kønsidentifikation. Kønsvalg tilbyder en løsning til personer med X-linkede sygdomme, der er i gang med at blive gravide. Udvælgelsen af ​​et kvindeligt embryo-afkom bruges til at forhindre overførsel af X-bundne Mendels recessive sygdomme. Sådanne X-bundne Mendelske sygdomme omfatter Duchenne muskeldystrofi (DMD) og hæmofili A og B, som sjældent ses hos kvinder, fordi afkommet sandsynligvis ikke arver to kopier af den recessive allel. Da to kopier af den mutante X -allel er påkrævet for at sygdommen kan overføres til det kvindelige afkom, vil hunner i værste fald være bærere af sygdommen, men har nødvendigvis ikke et dominerende gen for sygdommen. Hanner kræver på den anden side kun en kopi af den mutante X -allel for at sygdommen kan forekomme i ens fænotype, og derfor har den mandlige afkom fra en bærermor en 50% chance for at få sygdommen. Årsager kan omfatte sjældenheden af ​​tilstanden, eller fordi berørte mænd er reproduktivt dårligt stillede. Derfor anvendes medicinske anvendelser af PGD til udvælgelse af et kvindeligt afkom for at forhindre overførsel af X-bundne Mendels recessive lidelser ofte. Preimplantation genetisk diagnose, der anvendes til kønsvalg, kan bruges til ikke-mendelske lidelser, der er betydeligt mere udbredt i det ene køn. Tre vurderinger foretages forud for påbegyndelsen af ​​PGD -processen til forebyggelse af disse arvelige lidelser. For at validere brugen af ​​PGD er kønsvalg valgt på grund af alvorligheden af ​​den arvelige tilstand, risikoforholdet i enten køn eller mulighederne for sygdomsbehandling.

Mindre handicap

En undersøgelse fra 2006 afslører, at PGD lejlighedsvis har været brugt til at vælge et embryo for tilstedeværelsen af ​​en bestemt sygdom eller handicap, såsom døvhed, for at barnet ville dele denne egenskab med forældrene.

Klassifikation

Vi skelner mellem tre typer PGT afhængigt af de evaluerede defekter:

• PGT-A : også kaldet præimplantational genetisk screening (PGS). Forbedrer graviditetsraten ved at tillade kassering af aneuploider og valg af euploide embryoner til overførsel. Euploide embryoner er mere tilbøjelige til at implantere og udvikle sig til en sund graviditet. NGS og FISH er de hyppigst anvendte teknikker til diagnosticering af monosomier, trisomier og poliploidier.
• PGT-M : i dette tilfælde evalueres monogene sygdomme i embryoet. Monogene lidelser er forårsaget af enkeltgenmutationer (autosomal recessiv, autosomaldominant, X-bundet ). Tidligere blev PCR brugt til PGT-M. Men for nylig bruger PGT-M imidlertid array- og NGS-teknologi.
• PGT-SR : enhver strukturel abnormitet i kromosomet tages i betragtning ( translokationer , inversioner , duplikationer , insertioner , deletioner ). Forskellige anvendte teknikker: PCR, FISH og NGS.

Tekniske aspekter

PGD ​​er en form for genetisk diagnose udført før implantation. Dette indebærer, at patientens oocytter skal befrugtes in vitro og embryonerne opbevares i kultur, indtil diagnosen er fastlagt. Det er også nødvendigt at udføre en biopsi på disse embryoner for at få materiale til at udføre diagnosen. Selve diagnosen kan udføres ved hjælp af flere teknikker afhængigt af arten af ​​den undersøgte tilstand. Generelt anvendes PCR-baserede metoder til monogene lidelser og FISH til kromosomale abnormiteter og til kønsbestemmelse af de tilfælde, hvor der ikke er nogen PCR-protokol til rådighed for en X-forbundet sygdom. Disse teknikker skal tilpasses til at blive udført på blastomerer og skal testes grundigt på encellede modeller før klinisk brug. Endelig, efter embryoudskiftning, kan overskydende, upåvirkede embryoner af god kvalitet kryokonserveres, optøes og overføres tilbage i en næste cyklus.

At få embryoner

I øjeblikket opnås alle PGD -embryoner ved hjælp af assisteret reproduktionsteknologi , selvom brugen af ​​naturlige cyklusser og in vivo befrugtning efterfulgt af livmoderudskylning tidligere blev forsøgt og nu stort set opgives. For at opnå en stor gruppe oocytter gennemgår patienterne kontrolleret ovariestimulering (COH). COH udføres enten i en agonistprotokol ved hjælp af gonadotrophinfrigivende hormon (GnRH) analoger til hypofysensensibilisering, kombineret med humane menopausale gonadotrofiner (hMG) eller rekombinant follikelstimulerende hormon (FSH), eller en antagonistprotokol ved hjælp af rekombinant FSH kombineret med en GnRH -antagonist ifølge klinisk vurdering af patientens profil (alder, body mass index (BMI), endokrine parametre). hCG administreres, når mindst tre follikler med en gennemsnitlig diameter på mere end 17 mm ses ved transvaginal ultralydsscanning. Transvaginal ultralydstyret oocytudtagning er planlagt 36 timer efter hCG-administration. Lutealfasetilskud består af daglig intravaginal administration af 600 µg naturligt mikroniseret progesteron.

Oocytter denuderes omhyggeligt fra cumuluscellerne, da disse celler kan være en kilde til kontaminering under PGD, hvis der anvendes PCR-baseret teknologi. I størstedelen af ​​de rapporterede cyklusser anvendes intracytoplasmatisk sædinjektion (ICSI) i stedet for IVF. Hovedårsagerne er at forhindre kontaminering med restsæd, der klæber til zona pellucida, og undgå uventet befrugtningssvigt. ICSI-proceduren udføres på modne metaphase-II-oocytter, og befrugtning vurderes 16-18 timer efter. Embryoudviklingen evalueres yderligere hver dag før biopsi og indtil overførsel til kvindens livmoder. Under spaltningsfasen udføres embryoevaluering dagligt på basis af antallet, størrelsen, celleformen og fragmenteringshastigheden af ​​blastomererne. På dag 4 blev embryoner scoret i funktion af deres komprimeringsgrad, og blastocyster blev evalueret i henhold til kvaliteten af ​​throphectoderm og indre cellemasse og deres ekspansionsgrad.

Biopsiprocedurer

Da PGD kan udføres på celler fra forskellige udviklingsstadier, varierer biopsiprocedurerne tilsvarende. Teoretisk set kan biopsien udføres på alle præimplantationstrin, men kun tre er blevet foreslået: på ubefrugtede og befrugtede oocytter (til polære legemer, PB'er), på dag tre embryoner i spaltningsstadiet (til blastomerer) og på blastocyster (for trophectoderm-celler ).

Biopsiproceduren involverer altid to trin: åbningen af zona pellucida og fjernelse af cellerne. Der er forskellige tilgange til begge trin, herunder mekanisk, kemisk og fysisk (Tyrodes sure løsning) og laserteknologi til brud på zona pellucida, ekstrudering eller aspiration til fjernelse af PB'er og blastomerer og herniation af trophectoderm -cellerne.

Polar kropsbiopsi

En polarkropsbiopsi er prøveudtagning af et polært legeme , som er en lille haploide celle, der dannes samtidig som en ægcelle under oogenese , men som generelt ikke har evnen til at blive befrugtet . Sammenlignet med en blastocystbiopsi kan en polarkropsbiopsi potentielt have lavere omkostninger, mindre skadelige bivirkninger og mere følsom til at opdage abnormiteter. Den største fordel ved brugen af ​​polære kroppe i PGD er, at de ikke er nødvendige for vellykket befrugtning eller normal embryonal udvikling, hvilket sikrer ingen skadelig effekt for embryoet. En af ulemperne ved PB-biopsi er, at den kun giver oplysninger om moderens bidrag til embryoet, hvorfor der kan diagnosticeres tilfælde af maternelt nedarvet autosomalt dominerende og X-bundne lidelser, der udelukkende overføres maternelt, og autosomale recessive lidelser kan kun diagnosticeres delvist diagnosticeret. En anden ulempe er den øgede risiko for diagnostiske fejl, for eksempel på grund af nedbrydning af det genetiske materiale eller rekombinationshændelser, der fører til heterozygote første polære legemer.

Spaltningsfase biopsi (blastomerbiopsi)

Spaltningsbiopsi udføres generelt morgenen på dag tre efter befrugtning, når normalt udviklende embryoner når otte-cellestadiet. Biopsien udføres sædvanligvis på embryoner med mindre end 50% af deucleated fragmenter og på et 8-cellers eller senere udviklingstrin. Der laves et hul i zona pellucida, og en eller to blastomerer indeholdende en kerne aspireres forsigtigt eller ekstruderes forsigtigt gennem åbningen. Den største fordel ved spaltnings-biopsi frem for PB-analyse er, at begge forældres genetiske input kan studeres. På den anden side viser det sig, at spaltningsstadieembryoer har en høj grad af kromosomal mosaicisme , hvilket sætter spørgsmålstegn ved, om de opnåede resultater på en eller to blastomerer vil være repræsentative for resten af ​​embryoet. Det er af denne grund, at nogle programmer anvender en kombination af PB -biopsi og blastomerbiopsi. Endvidere giver spaltningsbiopsi, som i tilfælde af PB-biopsi, en meget begrænset mængde væv til diagnose, hvilket nødvendiggør udvikling af encellede PCR- og FISH- teknikker. Selvom teoretisk PB-biopsi og blastocystbiopsi er mindre skadelige end spaltningsfase-biopsi, er dette stadig den fremherskende metode. Det bruges i cirka 94% af de PGD -cyklusser, der blev rapporteret til ESHRE PGD -konsortiet. Hovedårsagerne er, at det giver mulighed for en sikrere og mere komplet diagnose end PB -biopsi og stadig giver nok tid til at afslutte diagnosen, før embryonerne skal udskiftes i patientens livmoder, i modsætning til blastocystbiopsi. Af alle spaltningsfaser er det generelt enigt om, at det optimale tidspunkt for biopsi er på otte-cellestadiet. Det er diagnostisk sikrere end PB -biopsien, og i modsætning til blastocystbiopsi giver det mulighed for at diagnosticere embryonerne før dag 5. På dette stadium er cellerne stadig totipotente, og embryonerne komprimerer endnu ikke. Selvom det har vist sig, at op til en fjerdedel af et menneskeligt embryo kan fjernes uden at forstyrre dets udvikling, er det stadig uundgåeligt, om biopsi af en eller to celler korrelerer med embryoets evne til at videreudvikle, implantere og vokse til en fuld graviditet.

Ikke alle metoder til åbning af zona pellucida har samme succesrate, fordi embryoets og/eller blastomeres trivsel kan påvirkes af den procedure, der blev brugt til biopsien. Zona -boring med syre Tyrodes løsning (ZD) blev set på i sammenligning med delvis zona -dissektion (PZD) for at bestemme, hvilken teknik der ville føre til mere vellykkede graviditeter og have mindre effekt på embryoet og/eller blastomeren. ZD bruger et fordøjelsesenzym som pronase, hvilket gør det til en kemisk boremetode. De kemikalier, der bruges i ZD, kan have en skadelig virkning på embryoet. PZD bruger en glasmikronåle til at skære zona pellucida, hvilket gør det til en mekanisk dissektionsmetode, der typisk har brug for dygtige hænder til at udføre proceduren. I en undersøgelse, der omfattede 71 par, blev ZD udført i 26 cyklusser fra 19 par, og PZD blev udført i 59 cyklusser fra 52 par. I encelleanalysen var der en succesrate på 87,5% i PZD-gruppen og 85,4% i ZD-gruppen. Moderens alder, antallet af hentede oocytter, befrugtningshastigheden og andre variabler var ikke forskellige mellem ZD- og PZD -grupperne. Det blev fundet, at PZD førte til en signifikant højere graviditetsrate (40,7% vs 15,4%), igangværende graviditet (35,6% vs 11,5%) og implantation (18,1% vs 5,7%) end ZD. Dette antyder, at brug af den mekaniske metode til PZD i blastomerbiopsier til præimplantation genetisk diagnose kan være mere dygtig end at bruge den kemiske metode til ZD. Succesen med PZD frem for ZD kan tilskrives det kemiske middel i ZD, der har en skadelig virkning på embryoet og/eller blastomeren. I øjeblikket er zona -boring ved hjælp af en laser den fremherskende metode til at åbne zona pellucida. At bruge en laser er en lettere teknik end at bruge mekaniske eller kemiske midler. Laserboring kan imidlertid være skadeligt for embryoet, og det er meget dyrt for in vitro -befrugtningslaboratorier at bruge, især når PGD ikke er en udbredt proces i moderne tid. PZD kan være et levedygtigt alternativ til disse spørgsmål.

Blastocystbiopsi

I et forsøg på at overvinde vanskelighederne i forbindelse med encellede teknikker er det blevet foreslået at biopsere embryoner på blastocyststadiet, hvilket giver en større mængde udgangsmateriale til diagnose. Det er blevet vist, at hvis mere end to celler er til stede i det samme prøverør, ville de største tekniske problemer med enkeltcellet PCR eller FISH praktisk talt forsvinde. På den anden side, som i tilfælde af biopsi i spaltningsstadiet, kan de kromosomale forskelle mellem den indre cellemasse og trophectoderm (TE) reducere diagnosens nøjagtighed, selvom denne mosaicisme er rapporteret at være lavere end i spaltningsstadiet embryoner.

TE -biopsi har vist sig at være en succes i dyremodeller såsom kaniner, mus og primater. Disse undersøgelser viser, at fjernelsen af ​​nogle TE -celler ikke er skadelig for den videre in vivo -udvikling af embryoet.

Human blastocyst-stage biopsi for PGD udføres ved at lave et hul i ZP på dag tre af in vitro- kultur. Dette gør det muligt for den udviklende TE at stikke frem efter blastulation, hvilket letter biopsien. På dag fem efter befrugtningen udskilles cirka fem celler fra TE ved hjælp af en glasnål eller laserenergi, hvilket efterlader embryoet stort set intakt og uden tab af indre cellemasse. Efter diagnosen kan embryonerne udskiftes i løbet af den samme cyklus eller kryokonserveres og overføres i en efterfølgende cyklus.

Der er to ulemper ved denne tilgang på grund af det stadium, hvor den udføres. For det første når kun cirka halvdelen af ​​præimplantationsembryonerne blastocyststadiet. Dette kan begrænse antallet af tilgængelige blastocyster til biopsi, hvilket i nogle tilfælde begrænser succesen med PGD. Mc Arthur og kolleger rapporterer, at 21% af de påbegyndte PGD -cykler ikke havde noget embryo egnet til TE -biopsi. Dette tal er cirka fire gange højere end gennemsnittet fra ESHRE PGD-konsortiedata, hvor PB og spaltningsfase biopsi er de dominerende rapporterede metoder. På den anden side begrænser forsinkelse af biopsien til dette sene udviklingsstadium tiden til at udføre den genetiske diagnose, hvilket gør det vanskeligt at gentage en anden runde PCR eller rehybridisere FISH -sonder, før embryonerne skal overføres tilbage til patienten.

Cumulus celleprøvetagning

Prøvetagning af cumulusceller kan udføres ud over en prøveudtagning af polære legemer eller celler fra embryoet. På grund af de molekylære interaktioner mellem cumulusceller og oocytten kan genekspressionsprofilering af cumulusceller udføres for at estimere oocytkvaliteten og effektiviteten af ​​en ovariehyperstimuleringsprotokol og kan indirekte forudsige aneuploidi , embryoudvikling og graviditetsresultater.

Ikke-invasive præimplantationsgenetiske screeningsmetoder (NIPGS)

Traditionel embryobiopsi kan være invasiv og dyr. Derfor har forskere en løbende søgen efter at finde en mindre invasive metoder til præimplantation genetisk testning. Undersøgelser om nye ikke-invasive præimplantationsgenetiske screeningsmetoder (NIPGS) såsom blastocoelvæske og brugte embryomedier er for nylig blevet offentliggjort som et alternativ til traditionelle metoder

Preimplantation Genetisk screeningstest ved hjælp af Blastocoel Fluid (BF) Under en normal IVF -proces øger god praksis med at forglas embryoner chancen for en sund graviditet. Under vitrifikationsprocessen dehydratiseres en udviklet blast, og den og dens blastocoelhulrum kollapser for fryseprocessen. Der er mange metoder, der er blevet brugt til at lette sammenbruddet, herunder laserpuls, gentagen mikropipettering, mikronålspunktering eller mikrosugning Normalt vil denne væske derefter kasseres, men med præimplantation genetisk test af BL, bliver denne væske gemt og derefter testet for DNA. Dette DNA menes at være fra celler, der har gennemgået apoptose fundet i det udviklende embryo

Preimplantation genetisk testning ved hjælp af Blastocyst Culture Conditioned Medium (BCCM) En anden metode til mindre invasiv præimplantation genetisk test involverer test af de kulturmedier, embryoet har udviklet sig i. Det er blevet bemærket, at embryoet frigiver DNA -fragmenter fra cellerne, der er døde inden for inkubationsperioden . Med denne viden har forskere begrundet, at de kunne isolere dette DNA og bruge det til præimplantation genetisk test

Fordele og konsekvenser ved mindre invasiv præimplantation genetisk test Selvom der er modstridende beviser for, om de mere traditionelle metoder til præimplantation genetisk test er skadelige for embryoet, er der nyere metoder til mindre invasive og lige så effektive testmetoder. Derfor har vi vendt os til præimplantation genetisk test ved hjælp af blastocoelvæske og brugte embryomedier. Et problem med disse alternativer er den minimale mængde DNA, der er at arbejde med. Et andet meget vigtigt spørgsmål er, om denne teknologi er korrekt eller ej. Begge disse bekymringer blev for nylig behandlet af Kuznyetsov. Kuznyetsov besluttede at bruge begge metoder til at kombinere mængden af ​​DNA hentet fra begge teknikker. Så når DNA'et var isoleret, blev det brugt til genetisk test før implantation. Resultaterne viste, at når begge metoder Blastocyst Fluid og Embryo Spent Media blev brugt i kombination, viste de en cordance rate for hele kromosomkopien på 87,5% sammenlignet med trophectoderm, 96,4% sammenlignet med hele Blastocyst (guldstandard). Derudover var de efter amplifikation ved hjælp af denne nye metode i stand til at producere 25,0-54,0 ng/ul DNA pr. Prøve. Med traditionelle metoder såsom trophectoderm indsamlede de 10 til 44 ng/ul

Genetiske analyseteknikker

Fluorescerende in situ hybridisering (FISH) og Polymerase kædereaktion (PCR) er de to almindeligt anvendte første generations teknologier i PGD. PCR bruges generelt til at diagnosticere monogene lidelser, og FISH bruges til påvisning af kromosomale abnormiteter (f.eks. Aneuploidyscreening eller kromosomale translokationer). I løbet af de sidste par år har forskellige fremskridt inden for PGD -test muliggjort en forbedring af omfanget og nøjagtigheden af ​​de tilgængelige resultater afhængigt af den anvendte teknologi. For nylig blev der udviklet en metode, der gør det muligt at reparere metafaseplader fra enkelte blastomerer. Denne teknik i forbindelse med FISH, m-FISH kan producere mere pålidelige resultater, da analyse udføres på hele metafaseplader

Ud over FISH og PCR testes enkeltcellens genom -sekventering som en metode til præimplantation genetisk diagnose. Dette karakteriserer den komplette DNA -sekvens af embryoets genom .

FISK

FISH er den mest almindeligt anvendte metode til at bestemme den kromosomale sammensætning af et embryo. I modsætning til karyotyping kan den bruges på interfasekromosomer, så den kan bruges på PB'er, blastomerer og TE -prøver. Cellerne fikseres på glasmikroskopglas og hybridiseres med DNA -prober. Hver af disse prober er specifikke for en del af et kromosom og er mærket med et fluorokrom.

Dual FISH blev anset for at være en effektiv teknik til bestemmelse af køn af humane præimplantationsembryoer og den ekstra evne til at detektere unormale kromosomkopienumre, hvilket ikke er muligt via polymerasekædereaktionen (PCR).

I øjeblikket er der et stort panel af prober tilgængelige for forskellige segmenter af alle kromosomer, men det begrænsede antal forskellige fluorokromer begrænser antallet af signaler, der kan analyseres samtidigt.

Type og antal sonder, der bruges på en prøve, afhænger af indikationen. Til kønsbestemmelse (bruges f.eks. Når en PCR-protokol for en given X-forbundet lidelse ikke er tilgængelig), anvendes prober for X- og Y-kromosomerne sammen med sonder for et eller flere af autosomerne som en intern FISH-kontrol. Flere prober kan tilføjes for at kontrollere for aneuploidier, især dem, der kan give anledning til en levedygtig graviditet (såsom en trisomi 21). Brug af prober til kromosomer X, Y, 13, 14, 15, 16, 18, 21 og 22 har potentiale til at detektere 70% af de aneuploidier, der findes ved spontane aborter.

For at kunne analysere flere kromosomer på den samme prøve kan der udføres op til tre på hinanden følgende runder FISH. I tilfælde af kromosomomlægninger skal der vælges specifikke kombinationer af prober, der flankerer området af interesse. FISH -teknikken anses for at have en fejlprocent på mellem 5 og 10%.

Hovedproblemet ved brugen af ​​FISH til at studere den kromosomale sammensætning af embryoner er den forhøjede mosaicisme, der observeres på det menneskelige præimplantationsstadium. En metaanalyse af mere end 800 embryoner kom til det resultat, at cirka 75% af præimplantationsembryoer er mosaik, hvoraf cirka 60% er diploid-aneuploid mosaik og cirka 15% aneuploid mosaik. Li og kolleger fandt ud af, at 40% af de embryoner, der blev diagnosticeret som aneuploide på dag 3, viste sig at have en euploid indre cellemasse på dag 6. Staessen og samarbejdspartnere fandt ud af, at 17,5% af embryonerne blev diagnosticeret som unormale under PGS og udsat for post-PGD-genanalyse viste sig også at indeholde normale celler, og 8,4% blev fundet groft normale. Som en konsekvens er det blevet stillet spørgsmålstegn ved, om de en eller to celler, der er undersøgt fra et embryo, faktisk er repræsentative for det komplette embryo, og om levedygtige embryoner ikke kasseres på grund af teknikkens begrænsninger.

PCR

Kary Mullis opfattede PCR i 1985 som en in vitro forenklet gengivelse af in vivo -processen med DNA -replikation . Ved at udnytte de kemiske egenskaber ved DNA og tilgængeligheden af ​​termostabile DNA -polymeraser muliggør PCR berigelse af en DNA -prøve for en bestemt sekvens. PCR giver mulighed for at opnå en stor mængde kopier af en bestemt strækning af genomet, hvilket muliggør yderligere analyse. Det er en yderst følsom og specifik teknologi, som gør den velegnet til alle former for genetisk diagnose, herunder PGD. I øjeblikket findes der mange forskellige variationer på selve PCR såvel som på de forskellige metoder til posterior analyse af PCR -produkterne.

Når man bruger PCR i PGD, står man over for et problem, der ikke findes i rutinemæssig genetisk analyse: de små mængder tilgængeligt genomisk DNA. Da PGD udføres på enkeltceller, skal PCR tilpasses og skubbes til dets fysiske grænser og bruge den mindste mulige mængde skabelon: som er en streng. Dette indebærer en lang proces med finjustering af PCR-betingelserne og en modtagelighed for alle problemerne med konventionel PCR, men flere grader intensiveres. Det høje antal nødvendige PCR-cykler og den begrænsede mængde skabelon gør enkeltcellet PCR meget følsom over for kontaminering. Et andet problem specifikt for enkeltcellet PCR er fænomenet allel drop-out (ADO). Den består af tilfældig ikke-amplifikation af en af ​​de alleler, der er til stede i en heterozygotisk prøve. ADO kompromitterer seriøst PGD's pålidelighed, da et heterozygotisk embryo kan diagnosticeres som påvirket eller upåvirket, afhængigt af hvilken allel der ikke formår at forstærke. Dette vedrører især PGD for autosomalt dominerende lidelser, hvor ADO for den berørte allel kan føre til overførsel af et påvirket embryo.

Adskillige PCR-baserede assays er blevet udviklet til forskellige sygdomme, f.eks. Gentagelse af tripletgener forbundet med myotonisk dystrofi og skrøbelige X i enkelte humane somatiske celler, gameter og embryoner.

NGS

Fra 2014 udføres næste generations sekventering (NGS) i PGT. NGS, også kendt som massiv parallel sekventering, er en gruppe teknikker, der er i stand til at sekvensere store mængder DNA til en rimelig pris og tid. Det kan give os et generelt perspektiv af det komplette embryo -genom, herunder det mitokondrielle . Disse teknikker er baseret på sekventering af korte læsninger omkring 400 baser hver og overlapning af disse læsninger med kraftfuld justeringssoftware.

På samme måde giver NGS os også mulighed for at detektere aneuploidier i de 24 kromosomer og enkeltgendefekter, når der er en indikation fra bærerforældrene. Den største fordel er, at NGS kan kombinere påvisning af både aneuploidier og monogene sygdomme med en enkelt biopsi og har reduceret overkommelige omkostninger, hvilket gør det mere tilgængeligt.

To eksempler på NGS er pyrosekventeringen og den reversible farveterminator .

Etablering af en diagnose

Etableringen af ​​en diagnose i PGD er ikke altid ligetil. Kriterierne for valg af embryoner, der skal udskiftes efter FISH- eller PCR -resultater, er ikke ens i alle centre. I tilfælde af FISH erstattes i nogle centre kun embryoner, der viser sig at være kromosomalt normale (det vil sige at vise to signaler for gonosomerne og de analyserede autosomer) efter analysen af ​​en eller to blastomerer, og når to blastomerer analyseres , resultaterne skal være i overensstemmelse. Andre centre hævder, at embryoner diagnosticeret som monosomisk kunne overføres, fordi den falske monosomi (dvs. tab af et FISH -signal i en normal diploid celle) er den hyppigst forekommende fejldiagnose. I disse tilfælde er der ingen risiko for en aneuploid graviditet, og normale diploide embryoner går ikke tabt ved overførsel på grund af en FISH -fejl. Desuden har det vist sig, at embryoner diagnosticeret som monosomiske på dag 3 (undtagen kromosomer X og 21) aldrig udvikler sig til blastocyst, hvilket korrelerer med, at disse monosomier aldrig observeres under igangværende graviditeter.

Diagnose og fejldiagnose i PGD ved hjælp af PCR er matematisk modelleret i arbejdet fra Navidi og Arnheim og Lewis og samarbejdspartnere. Den vigtigste konklusion af disse publikationer er, at for en effektiv og præcis diagnose af et embryo kræves to genotyper. Dette kan være baseret på en koblet markør og sygdomsgenotyper fra en enkelt celle eller på markør/sygdomsgenotyper af to celler. Et interessant aspekt undersøgt i disse artikler er den detaljerede undersøgelse af alle mulige kombinationer af alleler, der kan forekomme i PCR -resultaterne for et bestemt embryo. Forfatterne angiver, at nogle af de genotyper, der kan opnås under diagnosen, muligvis ikke er i overensstemmelse med det forventede mønster af koblede markørgenotyper, men stadig giver tilstrækkelig tillid til embryoets upåvirkede genotype. Selvom disse modeller er betryggende, er de baseret på en teoretisk model, og diagnosen er generelt fastlagt på et mere konservativt grundlag med det formål at undgå muligheden for fejldiagnose. Når uventede alleler optræder under analysen af ​​en celle, afhængigt af den observerede genotype, anses det for, at enten er en unormal celle blevet analyseret, eller at der er opstået kontaminering, og at der ikke kan stilles nogen diagnose. Et tilfælde, hvor abnormiteten af ​​den analyserede celle klart kan identificeres, er når der ved hjælp af en multiplex PCR til sammenkædede markører kun findes en af ​​forældrenes alleler i prøven. I dette tilfælde kan cellen betragtes som bærende en monosomi for det kromosom, som markørerne er placeret på, eller muligvis som haploid. Udseendet af en enkelt allel, der angiver en påvirket genotype, anses for tilstrækkelig til at diagnosticere embryoet som påvirket, og embryoer, der er blevet diagnosticeret med en komplet upåvirket genotype, foretrækkes til erstatning. Selvom denne politik kan føre til et lavere antal upåvirkede embryoner, der er egnede til overførsel, anses det for at være at foretrække frem for muligheden for en fejldiagnose.

Preimplantation genetisk haplotyping

Preimplantation genetisk haplotyping (PGH) er en PGD -teknik, hvor en haplotype af genetiske markører, der har statistiske associationer til en målsygdom, identificeres frem for mutationen, der forårsager sygdommen.

Når først et panel med tilhørende genetiske markører er etableret for en bestemt sygdom, kan den bruges til alle bærere af den sygdom. I modsætning hertil, da selv en monogen sygdom kan skyldes mange forskellige mutationer inden for det berørte gen, ville konventionelle PGD-metoder baseret på at finde en specifik mutation kræve mutationsspecifikke tests. Således udvider PGH tilgængeligheden af ​​PGD til tilfælde, hvor mutationsspecifikke tests ikke er tilgængelige.

PGH har også en fordel i forhold til FISH, idet FISH normalt ikke er i stand til at foretage differentiering mellem embryoner, der har den afbalancerede form for en kromosomal translokation, og dem, der bærer de homologe normale kromosomer. Denne manglende evne kan være alvorligt skadelig for den stillede diagnose. PGH kan foretage den forskel, som FISH ofte ikke kan. PGH gør dette ved at bruge polymorfe markører, der er bedre egnede til at genkende translokationer. Disse polymorfe markører er i stand til at skelne mellem embryoner, der havde normale, afbalancerede og ubalancerede translokationer. FISH kræver også mere cellefiksering til analyse, mens PGH kun kræver overførsel af celler til polymerasekædereaktionsrør. Celleoverførslen er en enklere metode og efterlader mindre plads til analysesvigt.

Embryooverførsel og kryokonservering af overskydende embryoner

Embryooverførsel udføres normalt på dag tre eller dag fem efter befrugtning, timingen afhænger af de teknikker, der bruges til PGD og standardprocedurerne for IVF- centret, hvor det udføres.

Med introduktionen i Europa af single-embryo transfer-politikken, der sigter mod at reducere forekomsten af ​​multiple graviditeter efter ART, udskiftes normalt et embryo eller en tidlig blastocyst i livmoderen. Serum hCG bestemmes på dag 12. Hvis en graviditet er etableret, udføres en ultralydsundersøgelse efter 7 uger for at bekræfte tilstedeværelsen af ​​et føtal hjerteslag. Par rådes generelt til at gennemgå PND på grund af, omend lav risiko for fejldiagnose.

Det er ikke usædvanligt, at der efter PGD er flere embryoner, der er egnede til at overføre tilbage til kvinden end nødvendigt. For de par, der gennemgår PGD, er disse embryoner meget værdifulde, da parrets nuværende cyklus muligvis ikke fører til en igangværende graviditet. Embryokryokonservering og senere optøning og udskiftning kan give dem en ny chance for graviditet uden at skulle gentage de besværlige og dyre ART- og PGD -procedurer.

Bivirkninger ved embryo

PGD/PGS er en invasiv procedure, der kræver en seriøs overvejelse, ifølge Michael Tucker, ph.d., videnskabelig direktør og chefembryolog ved Georgia Reproductive Specialists i Atlanta. En af risiciene ved PGD omfatter skader på embryoet under biopsiproceduren (hvilket igen ødelægger embryoet som helhed), ifølge Serena H. Chen, MD, en reproduktiv endokrinolog i New Jersey med IRMS Reproductive Medicine i Saint Barnabas. En anden risiko er kryokonservering, hvor embryoet opbevares i frossen tilstand og optøes senere til proceduren. Omkring 20% ​​af de optøede embryoner overlever ikke. Der har været en undersøgelse, der tyder på, at et biopsieret embryo har en mindre grad af overlevende kryokonservering. En anden undersøgelse tyder på, at PGS med biopsi i spaltningsstadiet resulterer i en signifikant lavere levende fødselsrate for kvinder i en avanceret moderalder. En anden undersøgelse anbefaler også forsigtighed og en langsigtet opfølgning, da PGD/PGS øger den perinatale dødelighed i flere graviditeter.

I en musemodelundersøgelse er PGD blevet tilskrevet forskellige langsigtede risici, herunder en vægtøgning og hukommelsesnedgang; en proteomisk analyse af voksne musehjerner viste signifikante forskelle mellem biopsierne og kontrolgrupperne, hvoraf mange er tæt forbundet med neurodegenerative lidelser som Alzheimers og Downs syndrom.

Etiske problemer

PGD ​​har rejst etiske spørgsmål, selvom denne tilgang kunne reducere afhængigheden af ​​fosterets fravalg under graviditeten. Teknikken kan bruges til prænatal kønsdifferentiering af embryoet og dermed potentielt kan bruges til at vælge embryoner af det ene køn frem for det andet i forbindelse med " familiebalancering ". Det kan være muligt at træffe andre "sociale udvælgelses" valg i fremtiden, der introducerer socioøkonomiske bekymringer. Kun upåvirkede embryoner implanteres i en kvindes livmoder; dem, der er berørt, kasseres enten eller doneres til videnskab.

PGD ​​har potentiale til at screene for genetiske problemer, der ikke er relateret til medicinsk nødvendighed , såsom intelligens og skønhed, og mod negative træk som handicap. Det medicinske samfund har betragtet dette som et kontraintuitivt og kontroversielt forslag. Udsigten til en " designer baby " er tæt forbundet med PGD -teknikken, hvilket skaber en frygt for, at stigende hyppighed af genetisk screening vil bevæge sig mod en moderne eugenik -bevægelse. På den anden side foreslås et princip om reproduktiv gavnlighed , hvilket er en formodet moralsk forpligtelse for forældre i stand til at vælge deres børn til fordel for dem, der forventes at få det bedste liv. Et argument til fordel for dette princip er, at træk (såsom empati, hukommelse osv.) Er "alle formål" i den forstand, at de har en instrumentel værdi til at realisere de livsplaner, barnet måtte komme til at have. Walter Veit har argumenteret for, at der ikke er nogen iboende moralsk forskel mellem at 'skabe' og 'vælge' et liv, og dermed gøre eugenik til en naturlig konsekvens af at acceptere princippet om reproduktiv gavnlighed.

Handicap

I 2006 rapporterede tre procent af PGD -klinikkerne i USA, at de havde valgt et embryo til tilstedeværelse af et handicap. De involverede par blev beskyldt for med vilje at have skadet et barn. Denne praksis er bemærkelsesværdig i dværgvækst, hvor forældre bevidst skaber et barn, der er en dværg. Ved udvælgelsen af ​​en frelsersøskende til at levere en matchende knoglemarvstransplantation til et allerede eksisterende berørt barn, er der spørgsmål, herunder donorbarnets omsætning og velfærd.

Ved at stole på resultatet af en celle fra multicelleembryoet fungerer PGD under antagelsen om, at denne celle er repræsentativ for resten af ​​embryoet. Dette er muligvis ikke tilfældet, da forekomsten af ​​mosaik ofte er relativt høj. Nogle gange kan PGD resultere i et falsk negativt resultat, der kan føre til accept af et unormalt embryo eller i et falsk positivt resultat, der kan føre til fravalg af et normalt embryo.

Et andet problematisk tilfælde er tilfældene med ønsket ikke-afsløring af PGD-resultater for nogle genetiske lidelser, der måske endnu ikke er synlige hos en forælder, såsom Huntington sygdom . Det anvendes, når patienter ikke ønsker at kende deres bærerstatus, men ønsker at sikre, at de har afkom fri for sygdommen. Denne procedure kan placere praktiserende læger i tvivlsomme etiske situationer, f.eks. Når der ikke er tilgængelige sunde, upåvirkede embryoner til overførsel, og der skal foretages en overført overførsel, så patienten ikke har mistanke om, at han/hun er bærer. Den ESHRE etik Taskforcen anbefaler øjeblikket bruger test udelukkelse i stedet. Ekskluderingstest er baseret på en koblingsanalyse med polymorfe markører, hvor kromosomernes forældres og bedsteforældres oprindelse kan fastslås. På denne måde erstattes kun embryoner, der ikke indeholder kromosomet, der stammer fra den berørte bedsteforælder, hvilket undgår behovet for at opdage selve mutationen.

På grund af problemets følsomhed, som ovenstående tilfælde demonstrerer, har præimplantationsgenetisk diagnose udløst en rig debat i den akademiske verden og ud over Et argument, der er udtrykt af dem, der er imod muligheden for at kassere et embryo for at undgå risikoen for handicap er, at af "eksistens og ikke -eksistens". Det vil sige med hensyn til den mulige negative selektion af embryoner, der kan udvikle "handicap" såsom døvhed. Ifølge dette argument, hvis de eneste to mulige alternativer er "at komme til verden" eller "ikke komme til verden", er det bedre at give dem ret til at komme til verden end alternativet om ikke at eksistere. Et andet meget udbredt argument for afvisning af praksis med "præimplantationsgenetisk diagnose" indebærer at tænke over betydningen af ​​udtrykket "handicap" (Bickenach & Chatterji, 2003). Argumentet til støtte for denne idé er, at "handicap" bestemmes af den sociale konstruktion vedrørende ideen om handicap. På den ene side beskriver medicinsproget handicap som noget, hvis funktionaliteter afviger fra en normal funktion. På den anden side understreger meget af handicapfællesskabet, at handicap ofte bestemmes af den måde, samfundet strukturerer verden på. En verden skabt til en bestemt type person. I denne forstand søger de samme mennesker, der fremhæver dette budskab, at understrege relativiteten af ​​begrebet "normalitet" eller "sundhed". Disse afhænger af tid, sted og samfund. I dette lys er argumentet altså, at vi ikke bør undgå fødslen af ​​mennesker med handicap - gennem præimplantationsgenetisk diagnose - men vi bør give os selv et svar på spørgsmålet: hvordan man beslutter, hvad der er et handicap for at tillade PGD. På den anden side, hvad angår argumenterne til fordel for præimplantationsgenetisk diagnose, fremhæver litteraturen hovedsageligt tre mest almindelige typer argumenter Den første type argument er hovedsageligt fremstillet af en del af den akademiske verden, der mener, at et handicap/lidelse sandsynligvis indebærer en reduceret sandsynlighed af blomstring for det ufødte barn. Således er denne type argumenter generelt relateret til ideen om muligheder i forbindelse med et individs liv, muligheder, der, hvis de tages, kan gøre en persons liv værd at leve Den næsthyppigste type argument i litteraturen afviger lidt fra den ovenfor nævnte i den fokuserer primært på forældrenes pligter i forhold til den menneskelige blomstring af individet. Dette argument bygger på tanken om, at forældre har en forpligtelse og et ansvar for at sikre, at det ufødte barn har minimumsbetingelser, der kan opfyldes. Endelig er en sidste kategori af argumenter en, der understreger vigtigheden af ​​at bringe personer med handicap/lidelser til verden med hensyn til, hvor meget de kan bidrage til den socioøkonomiske vækst i samfundet. Eller rettere, dette argument henviser til det faktum, at disse personer ikke ville være i stand til at bidrage til at forbedre status quo og trivsel i samfundet som helhed.

Intersex træk

PGD ​​tillader forskelsbehandling af personer med interseksuelle træk. Georgiann Davis hævder, at sådan forskelsbehandling ikke erkender, at mange mennesker med interseksuelle træk levede et fuldt og lykkeligt liv. Morgan Carpenter fremhæver fremkomsten af ​​flere interseksuelle variationer på en liste fra Human Fertilization and Embryology Authority over "alvorlige" "genetiske tilstande", der kan være fravalgt i Storbritannien, herunder 5 alfa reduktasemangel og androgen ufølsomhedssyndrom , træk, der er tydelige i elite kvindelige atleter og "verdens første åbent interseksuelle borgmester ". Organisation Intersex International Australia har opfordret Australian National Health and Medical Research Council til at forbyde sådanne indgreb og bemærker en "tæt sammenfiltring af interseksstatus, kønsidentitet og seksuel orientering i sociale forståelser af køn og kønsnormer og i medicinsk og medicinsk sociologilitteratur ".

I 2015 offentliggjorde Europarådet et udgivelsesdokument om menneskerettigheder og interseksuelle mennesker med bemærkning:

Intersex menneskers ret til liv kan krænkes ved diskriminerende "kønsudvælgelse" og "præimplantationsgenetisk diagnose, andre former for testning og udvælgelse af særlige egenskaber". Sådanne fravalg eller selektive aborter er uforenelige med etik og menneskerettighedsstandarder på grund af den forskelsbehandling, der er begået mod interseksuelle mennesker på grundlag af deres kønskarakteristika.

Frelser Søskende

PGD ​​kombineret med HLA (human leukocytantigen) matchning giver par mulighed for at vælge embryoner, der ikke er påvirket af en genetisk sygdom i håb om at redde et eksisterende, ramt barn. "Frelserens søskende" ville tænkeligt donere livreddende væv, der er kompatibelt med hans/hendes bror eller søster. Nogle etikere hævder, at de "frelser søskende", der er skabt ud fra denne procedure, vil blive behandlet som varer. Et andet argument mod at vælge "frelser søskende" er, at det fører til genetisk manipulerede "designer babyer". Dette argument fremkalder en diskussion mellem den moralske sondring mellem forbedring af træk og forebyggelse af sygdom. Endelig er modstandere af "frelser søskende" bekymrede for barnets velfærd, hovedsageligt at proceduren vil forårsage følelsesmæssig og psykologisk skade på barnet.

I øjeblikket findes der ikke nogen formel regulering eller retningslinjer i USA. De etiske beslutninger vedrørende denne procedure er efter skøn fra sundhedspersonale og deres patienter. I modsætning hertil er Storbritanniens brug af PGD reguleret af Human Fertilization and Embryology Act (HFEA), som kræver, at klinikker, der udfører denne teknik, opnår en licens og følger strenge kriterier.

Religiøse indvendinger

Nogle religiøse organisationer afviser denne procedure. Den romersk -katolske kirke tager for eksempel den holdning, at det indebærer ødelæggelse af menneskeliv. og udover det modsætter sig den nødvendige in vitro -befrugtning af æg i modstrid med aristoteliske naturprincipper. Den jødisk ortodokse religion mener, at reparation af genetik er i orden, men den understøtter ikke at få et barn, der er genetisk modet.

Psykologisk faktor

En metaanalyse, der blev udført, indikerer, at undersøgelser foretaget i PGD understreger fremtidig forskning. Dette skyldes positive holdningsundersøgelsesresultater, postpartum-opfølgningsundersøgelser viste ingen signifikante forskelle mellem dem, der havde brugt PGD og dem, der blev gravid naturligt, og etnografiske undersøgelser, der bekræftede, at personer med en tidligere historie med negative oplevelser fandt PGD som en lettelse. For det første, i holdningsundersøgelsen, rapporterede kvinder med en historie med infertilitet, graviditetsafbrydelse og gentagne aborter at have en mere positiv holdning til præimplantation genetisk diagnose. De accepterede mere at forfølge PGD. For det andet, på samme måde som den første holdningsundersøgelse, fandt et etnografisk studie foretaget i 2004 lignende resultater. Par med en historie med flere spontane aborter, infertilitet og et sygt barn, følte, at genetisk diagnose før præimplantation var en levedygtig mulighed. De følte også mere lettelse; "dem, der brugte teknologien, var faktisk motiverede til ikke at gentage graviditetstab". Sammenfattende, selvom nogle af disse undersøgelser er begrænsede på grund af deres tilbagevirkende kraft og begrænsede prøver, indikerer undersøgelsens resultater en generel tilfredshed blandt deltagerne ved brug af PGD. Forfatterne til undersøgelserne indikerer imidlertid, at disse undersøgelser understreger behovet for fremtidig forskning, såsom at skabe et prospektivt design med en gyldig psykologisk skala, der er nødvendig for at vurdere niveauer af stress og humør under embryonal overførsel og implantation.

Politik og lovlighed

Canada

Inden implementeringen af Assisted Human Reproduction Act (AHR) i 2004 var PGD ureguleret i Canada. Loven forbød kønsvalg til ikke-medicinske formål.

På grund af 2012's nationale budgetnedskæringer blev AHR fjernet. Reguleringen af ​​assisteret reproduktion blev derefter delegeret til hver provins. Denne delegation giver provinserne et stort spillerum til at gøre, som de vil. Som et resultat heraf har provinser som Quebec, Alberta og Manitoba lagt næsten alle IVF -omkostninger på det offentlige sundhedsregning. Dr. Santiago Munne, udvikler af den første PGD -test for Downs syndrom og grundlægger af Reprogenetics, så disse provinsielle beslutninger som en mulighed for sit firma til at vokse og åbne flere Reprogenetics -laboratorier rundt om i Canada. Han afviste alle kontroverser vedrørende katalogbabyer og oplyser, at han ikke havde noget problem med perfekte babyer.

Ontario har imidlertid ingen konkrete regler vedrørende PGD. Siden 2011 går ministeriet for børn og ungdomstjenester i Ontario ind for, at udviklingen finansieres af regeringen finansieret 'sikker frugtbarhed', embryoovervågning og assisteret reproduktionstjenester til alle Ontarians. Denne regeringsrapport viser, at Ontario ikke kun har ubestemte regler vedrørende assisterede reproduktionstjenester som IVF og PGD, men finansierer heller ikke nogen af ​​disse tjenester. De reproduktive klinikker, der findes, er alle private og ligger kun i Brampton, Markham, Mississauga, Scarborough, Toronto, London og Ottawa. I modsætning hertil har provinser som Alberta og Quebec ikke kun flere klinikker, men har også detaljerede love om assisteret reproduktion og statsfinansiering til denne praksis.

Tyskland

Før 2010 var brugen af ​​PGD i et lovligt gråt område. I 2010 fastslog Forbundsdomstolen i Tyskland , at PGD kan anvendes i undtagelsestilfælde. Den 7. juli 2011 vedtog Forbundsdagen en lov, der tillader PGD i visse tilfælde. Proceduren må kun bruges, når der er stor sandsynlighed for, at forældre vil overføre en genetisk sygdom, eller når der er en høj genetisk chance for en dødfødsel eller abort. Den 1. februar 2013 godkendte Forbundsrådet en regel, der regulerer, hvordan PGD kan bruges i praksis.

Ungarn

I Ungarn er PGD tilladt i tilfælde af alvorlige arvelige sygdomme (når genetisk risiko er over 10%). Den præimplantationsgenetiske diagnose for aneuploidi (PGS/PGD-A) er også en accepteret metode. Det anbefales i øjeblikket i tilfælde af flere aborter og/eller flere mislykkede IVF -behandlinger, og/eller når moderen er ældre end 35 år. På trods af at det er en godkendt metode, er PGD-A kun tilgængelig på én Fertility Clinic i Ungarn.

Indien

I Indien regulerer Ministry of Family Health and Welfare, konceptet under- Pre-Conception and Pre-Natal Diagnostic Techniques Act, 1994 . Loven blev yderligere revideret efter 1994, og nødvendige ændringer blev foretaget opdateret rettidigt på den indiske regerings officielle websted dedikeret til sagen. Anvendelse af PGD til kønsidentifikation/valg af barn er ulovlig i Indien.

Mexico

Fra 2006 leverede klinikker i Mexico lovligt PGD -tjenester.

Sydafrika

I Sydafrika, hvor retten til reproduktiv frihed er en forfatningsmæssigt beskyttet ret, er det blevet foreslået, at staten kun kan begrænse PGD i den grad, at forældrenes valg kan skade det kommende barn eller i den grad, at forældrenes valg vil forstærke samfundets fordomme.

Ukraine

Den præimplantation genetiske diagnose er tilladt i Ukraine og fra 1. november 2013 er reguleret af ordren fra Ukraines sundhedsministerium "Efter godkendelse af anvendelse af assisteret reproduktionsteknologi i Ukraine" fra 09.09.2013 nr. 787. [1] .

Det Forenede Kongerige

I Storbritannien er assisterede reproduktionsteknologier reguleret under Human Fertilization and Embryology Act (HFE) fra 2008. HFE Act omhandler imidlertid ikke spørgsmål omkring PGD. Således blev HFE Authority (HFEA) oprettet i 2003 for at fungere som et nationalt reguleringsorgan, der udsteder licenser og overvåger klinikker, der leverer PGD. HFEA tillader kun brug af PGD, når den pågældende klinik har en licens fra HFEA og fastsætter reglerne for denne licensering i sin Code of Practice ( [2] ). Hver klinik og hver medicinsk tilstand kræver en separat applikation, hvor HFEA kontrollerer egnetheden af ​​den foreslåede genetiske test og personalets færdigheder og faciliteter i klinikken. Først da kan PGD bruges til en patient.

HFEA forbyder strengt kønsvalg af sociale eller kulturelle årsager, men tillader det at undgå kønsrelaterede lidelser. De siger, at PGD ikke er acceptabelt for "sociale eller psykologiske egenskaber, normale fysiske variationer eller andre tilstande, der ikke er forbundet med handicap eller en alvorlig medicinsk tilstand." Det er dog tilgængeligt for par eller personer med en kendt familiehistorie med alvorlige genetiske sygdomme. Ikke desto mindre betragter HFEA interseksuelle variationer som en "alvorlig genetisk sygdom", såsom 5-alfa-reduktasemangel , et træk, der er forbundet med nogle elite-atleter. Intersex -fortalere argumenterer for, at sådanne beslutninger er baseret på sociale normer for kønskøn og kulturelle årsager.

Forenede Stater

Der findes ikke noget ensartet system til regulering af assisterede reproduktionsteknologier, herunder genetisk testning, i USA. Praksis og regulering af PGD falder oftest under statslove eller faglige retningslinjer, da den føderale regering ikke har direkte jurisdiktion over udøvelsen af ​​medicin. Hidtil har ingen stat implementeret love, der direkte vedrører PGD, og ​​derfor lader forskere og klinikere følge retningslinjer fastsat af de faglige sammenslutninger. Det Center for Disease Control og Forebyggelse (CDC), at alle klinikker leverer IVF skal indberette graviditet succesrate årligt til den føderale regering, men rapportering af PGD brug og resultaterne er ikke påkrævet. Professionelle organisationer, såsom American Society for Reproductive Medicine (ASRM), har givet begrænset vejledning om de etiske anvendelser af PGD. The American Society for Reproductive Medicine (ASRM) siger, at "PGD bør betragtes som en etableret teknik med specifikke og ekspanderende anvendelser til standard klinisk praksis." De siger også: "Mens brugen af ​​PGD med det formål at forhindre kønsbundne sygdomme er etisk, frarådes brugen af ​​PGD udelukkende til kønsvalg."

Referencer i populærkulturen

• PGD ​​spiller en fremtrædende rolle i filmen Gattaca fra 1997 . Filmen foregår i en nær fremtid, hvor PGD/IVF er den mest almindelige former for reproduktion. I filmen bruger forældre rutinemæssigt PGD til at vælge ønskværdige træk for deres børn, såsom højde, øjenfarve og frihed fra selv de mindste genetiske dispositioner til sygdom. De etiske konsekvenser af PGD udforskes gennem historien om hovedpersonen, der står over for diskrimination, fordi han blev undfanget uden sådanne metoder.
• PGD ​​nævnes i romanen My Sister's Keeper fra 2004 af karaktererne, da hovedpersonen, Anna Fitzgerald, blev skabt gennem PGD for at være en genetisk match for hendes APL -positive søster Kate, så hun kunne donere knoglemarv ved hendes fødsel for at hjælpe Kate med at kæmpe APL. Det nævnes også i bogen, at hendes forældre modtog kritik for handlingen.

Oplysninger om klinikkens hjemmesider

I en undersøgelse af 135 IVF-klinikker havde 88% hjemmesider, 70% nævnte PGD og 27% af sidstnævnte var universitets- eller hospitalsbaserede og 63% var private klinikker. Websteder, der nævner PGD, nævnte også anvendelser og fordele ved PGD langt mere end de tilhørende risici. Af de steder, der nævner PGD, beskrev 76% testning for single-gen sygdomme, men kun 35% nævnte risici for manglende måldiagnoser, og kun 18% nævnte risici for tab af embryoet. 14% beskrev PGD som nyt eller kontroversielt. Private klinikker var mere tilbøjelige end andre programmer til at liste visse PGD -risici som f.eks. Diagnostiske fejl eller bemærke, at PGD var ny eller kontroversiel, referencekilder til PGD -oplysninger, levere nøjagtighedsgrader for genetisk test af embryoner og tilbyde kønsvalg af sociale årsager .

Se også

• Bioetik
• Designer baby
• Familiebaseret QTL-kortlægning
• Sperm sortering

Noter og referencer

eksterne links

• Et interview med Dr. Mark Hughes, en pioner inden for PGD, der diskuterer PGD
• Preimplantation genetisk diagnose og kønsvalg- Hvordan fungerer det i Storbritannien?
• Liste over sygdomme screenet i Storbritannien i licens af HFEA
• Screening af embryoner for sygdom af Joe Palca @ NPR.org
• Religiøse synspunkter om PGD
• Preimplantation genetisk diagnose billeder. Billeder af polar krop og blastomer biopsi. Normale og unormale FISH -billeder.