Gær display - Yeast display
Gærvisning (eller gæroverfladevisning ) er en proteinteknisk teknik , der anvender ekspressionen af rekombinante proteiner, der er inkorporeret i gærens cellevæg til isolering og konstruktion af antistoffer .
Udvikling
Gærvisningsteknikken blev først udgivet af laboratoriet hos professor K. Dane Wittrup. Teknologien blev solgt til Abbott Laboratories i 2001.
Hvordan det virker
Et protein af interesse vises som en fusion til Aga2p -proteinet på gærens overflade. Aga2p -proteinet bruges naturligt af gær til at formidle celle -cellekontakter under gærcelleparring. Som sådan projekterer visning af et protein via Aga2p proteinet væk fra celleoverfladen, hvilket minimerer potentielle interaktioner med andre molekyler på gærcellevæggen. Anvendelsen af magnetisk separation og flowcytometri i forbindelse med en gær-display-bibliotek er en meget effektiv metode til at isolere høj affinitet protein ligander mod næsten enhver receptor gennem målrettet evolution .
Fordele og ulemper
Fordele ved gærvisning frem for andre in vitro evolution metoder omfatter eukaryotisk ekspression og behandling, kvalitetskontrolmekanismer for den eukaryote sekretoriske vej, minimale aviditetseffekter og kvantitativ biblioteksscreening gennem fluorescerende aktiveret cellesortering (FACS). Gær er eukaryote organismer, der tillader komplekse posttranslationelle ændringer af proteiner, som ingen andre displaybiblioteker kan levere.
Ulemper inkluderer mindre mutante biblioteksstørrelser sammenlignet med alternative metoder og differentiel glycosylering i gær sammenlignet med pattedyrsceller. Alternative metoder til proteinudvikling in vitro er pattedyrvisning , fagvisning , ribosomvisning , bakteriedisplay og mRNA -display .
Referencer
Yderligere læsning
- Boder, ET, Wittrup, KD; Biotechnol. Prog., 1998, 14, 55–62.
- Boder ET, Midelfort KS, Wittrup KD; Proc Natl Acad Sci, 2000, 97 (20): 10701-10705.
- Graff, CP, Chester, K., Begent, R., Wittrup, KD; Prot. Eng. Des. Sel., 2004, 17, 293–304.
- Feldhaus M, Siegel R .; Metoder i molekylærbiologi 263: 311-332 (2004).
- Weaver-Feldhaus, Jane M; Lou, Jianlong; Coleman, James R; Siegel, Robert W; Marks, James D; Feldhaus, Michael J (2004). "Gærparring til kombinatorisk Fab -bibliotekgenerering og overfladevisning" . FEBS Breve . 564 (1-2): 24–34. doi : 10.1016/S0014-5793 (04) 00309-6 . ISSN 0014-5793 . PMID 15094038 . S2CID 29737912 .