Gær display - Yeast display

Gærvisning (eller gæroverfladevisning ) er en proteinteknisk teknik , der anvender ekspressionen af rekombinante proteiner, der er inkorporeret i gærens cellevæg til isolering og konstruktion af antistoffer .

Udvikling

Gærvisningsteknikken blev først udgivet af laboratoriet hos professor K. Dane Wittrup. Teknologien blev solgt til Abbott Laboratories i 2001.

Hvordan det virker

Et protein af interesse vises som en fusion til Aga2p -proteinet på gærens overflade. Aga2p -proteinet bruges naturligt af gær til at formidle celle -cellekontakter under gærcelleparring. Som sådan projekterer visning af et protein via Aga2p proteinet væk fra celleoverfladen, hvilket minimerer potentielle interaktioner med andre molekyler på gærcellevæggen. Anvendelsen af magnetisk separation og flowcytometri i forbindelse med en gær-display-bibliotek er en meget effektiv metode til at isolere høj affinitet protein ligander mod næsten enhver receptor gennem målrettet evolution .

Fordele og ulemper

Fordele ved gærvisning frem for andre in vitro evolution metoder omfatter eukaryotisk ekspression og behandling, kvalitetskontrolmekanismer for den eukaryote sekretoriske vej, minimale aviditetseffekter og kvantitativ biblioteksscreening gennem fluorescerende aktiveret cellesortering (FACS). Gær er eukaryote organismer, der tillader komplekse posttranslationelle ændringer af proteiner, som ingen andre displaybiblioteker kan levere.

Ulemper inkluderer mindre mutante biblioteksstørrelser sammenlignet med alternative metoder og differentiel glycosylering i gær sammenlignet med pattedyrsceller. Alternative metoder til proteinudvikling in vitro er pattedyrvisning , fagvisning , ribosomvisning , bakteriedisplay og mRNA -display .

Referencer

Yderligere læsning